⑤清洗：用200μLMilliQ震荡清洗2次，每次10分钟；然后用200uL50%ACN震荡清洗2次，每次10分钟.⑥脱水：加ACN100μL脱水至胶粒变白，吸弃ACN。⑦用25mMNH4HCO3稀释Trypsin至15mg/ml，每管加10μL，稍微离心一下，让酶液与胶粒充分接触，4℃放置30min，待酶液被胶粒完全吸收，吸弃多余的酶液，加25mMNH4HCO320uL，37℃过夜(16h)!⑧质谱样品使用德国Bruker公司的UltraflexIII质谱仪开展分析，参数设置：反射模式；⑨离子源加速电压1为24kv；⑩加速电压2为22kv；11离子延迟提取0!

　　 我司主营其他生物制品领域的企业，主要以DNA pull down为主要产品，公司位于陕西省西安市雁塔区长安南路86号澳城大厦，更多产品信息详情请上www.xianchunfeng.com查看。西安淳风生物科技有限公司愿与社会各界朋友共同合作、共创双赢、共创精彩明天！

　　000ns；12真空度4×10-7Torr；13质谱信号单次扫描累加200次；14使用标准Maker峰作为外标校正质谱峰，正离子谱测定，测定范围控制在700-4000；15样品的肽质量指纹图谱，胰酶自降解峰和污染物质的峰自动剔除；16利用LIFT软件将PMF强度较大的5个峰进行串级质谱分析（峰强度大于300）。Pulldown技术的基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上（如Sepharose），但细胞抽提液经过该基质时，可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附，而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出!

　　 关于DNA pull down，作为一家主营产品为DNA pull down的厂家，西安淳风生物科技有限公司在其他生物制品这个行业中都享负盛名，在业界中也有一定的地位。

　　在此过程中，与DNA结合的蛋白质将被捕获并保留下来，而未结合的蛋白质和其他杂质则被洗脱！洗脱和分析：通过洗脱步骤将蛋白质从亲和介质上解离开来！可以使用不同的方法洗脱，如改变pH值、加入竞争性结合物等.而后，洗脱后的蛋白质可以通过Westernblotting、质谱分析等技术进行进一步的鉴定和分析.具体的实验条件和步骤可能因实验目的和样品类型而有所不同，并且实验中的各操作均需遵循相关实验室安全操作规程。

贵阳DNA pull down技术服务

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　　1．探针设计及标记①采用基因组DNA做模板，经PCR扩增启动子片段；②将其克隆至pMD-18T克隆载体，并测序鉴定成功；③使用PCR法或末端标记法标记探针；④标记的探针利用凝胶回收试剂盒纯化回收探针，并检测探针浓度；⑤-20℃保存，待用；2．Pulldown①预先混合5µg生物素标记的DNA和500µg核蛋白，置于冰上；②取100μL串珠，用冰冷PBS洗一次，5000g离心30秒；③将DNA与蛋白的混合物加到串珠中，重悬珠子；④4℃孵育1小时；⑤5000g，离心30秒，去除上清，收集沉淀；⑥用冰冷PBS洗串珠三次，5000g离心1分钟，尽可能去除上清，收集沉淀；⑦加入30μL蛋白上样缓冲液，重悬沉淀，沸水煮10分钟，3．蛋白质检测--WesternBlot①电泳：实验采用不连续系统蛋白质SDS-PAGE，浓度为5%浓缩胶和8~12%浓度分离胶；每孔上样40~60ug总蛋白，开始电压为100v,到达分离胶后调为120v；②转膜：转膜为恒流转膜，电流为200mA，时间根据目的蛋白分子量选择60~120min！

　　③封闭：蛋白膜放置到TBST溶液中，漂洗1-2分钟，以洗去膜上的转膜液；加入5%脱脂奶粉封闭液，室温50rpm，封闭60分钟。④孵育一抗：根据蛋白Marker指示将PVDF膜剪开，参考一抗浓度；将PVDF膜分别放入含各自一抗溶液中，4度孵育一抗过夜，然后放入TBST洗涤液，摇动洗涤3次，每次15min！⑤孵育二抗：参考二抗浓度，按比例稀释辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗！将PVDF膜加入稀释好的二抗，室温摇动孵育1h；放入TBST洗涤液，摇动洗涤3次，每次15min。