基本原理在验证植物蛋白互作时，荧光素酶互补实验(LuciferaseComplementationAssay,LCA)因其高灵敏度、可定量化、操作简单高效被广泛应用于植物学和动物学蛋白质互作研究目前,应用广泛的荧火素酶基因来源于北美萤火虫(fireflyluciferase),该基因编码550个氨基酸组成的荧火素酶蛋白(大小为62kDa).实验中,荧光素酶蛋白被切成N端和C端2个功能片段,即NLuc(2–416AA)和CLuc(398–550AA)！

　　操作步骤：载体构建：将两个蛋白质分别与M-NLUC和M-CLUC融合连接!抽提质粒.农杆菌转化！侵染烟草，测量发出荧光的信号值并拍照，计算荧光素酶相对活性，判断蛋白质之间是否互作!实验原理：来自萤火虫的荧光素酶可以分成N和C两段蛋白质而没有酶活，将N和C端各融合另外的两个蛋白质，如果这两个蛋白质在体内可以互作的话，那么荧光素的N和C端将在空间上靠近而恢复酶活，因此可以通过检测分段的荧光素酶可否恢复酶活而判断两个蛋白质之间在体内是否存在相互作用.

　　另外加入2ul100mM的乙酰丁香酮和100ul0。5MMES，28度摇床培养OD值约0左右。4000rpm常温离心10min，15分钟收集菌体。用含10mMMgCl2重悬菌体至OD值为0，以每毫升菌液加入2ul100mMAS，静置3小时以上！取正处于生长期的烟草叶片，使用针头在叶片反面扎些小孔。将侵染液装入5ml注射器内，用拇指按压注射器反板将液体从叶片下表皮注射到烟草叶片内！注射后，烟草叶片会出现湿润的现象。

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　　在一个实验体系中,待检测的2个目标蛋白分别与NLuc和CLuc融合,如果2个目标蛋白相互作用,则荧火素酶的NLuc和CLuc在空间上会足够靠近并正确组装,从而发挥荧火素酶活性,即分解底物产生荧光。Abstract:Protein-Proteininteractionsplayimportantrolesinvariouseukaryoticbiologicalprocesses。Comparedtoothertechniquesmeasuringprotein-proteininteractionsinplants,theLuciferaseComplementationAssay(LCA),basedonAgrobacterium-mediatedtransientexpressioninNicotianabenthamiana,isasensitive,reliable,highlyquantitativeandlowbackgroundmethodthatcanbeeasilyscaledupforhigh-throughputinteractomestudies。

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　　实验目的：检测蛋白质之间的体内相互作用！操作步骤：载体构建：将两个蛋白质分别与M-NLUC和M-CLUC融合连接.抽提质粒!农杆菌转化！侵染烟草，测量发出荧光的信号值并拍照，计算荧光素酶相对活性，判断蛋白质之间是否互作!注意事项：本实验必须要设计严谨的对照.连有目的基因的载体必须分别和另外一个空载体共转化，同时需要两个空载体之间共转化，以排除背景信号的影响!同时可以转化一对确定互作的蛋白质来评价系统的有效性！

　　材料与试剂携带表达载体的农杆菌菌株，2-4周的烟草植株，LB培养基，100mM乙酰丁香酮，0.5MMES（ph6），10mMMgCl2，恒温摇床，一次性注射器，分光光度计，Amp抗生素实验步骤挑取单克隆于1mlLB液体培养中，28~30°C震荡培养24小时。通常，LB中加入100ug/ml利福平（农杆菌株GV3101携带抗性），200ug/ml卡那霉素（载体携带）.将1ml过夜培养的农杆菌转接到25mlLB液体培养基中（加有与1相同的抗生素）!

　　Here,wedescribeaprotocolthatincludestwoalternativedatacollectionmethodstoqualitativeandquantitativeanalyseluminescenceorluminousintensitytodetectprotein-proteininteractionsinplantcells.原理利用农杆菌将外源基因导入烟草叶片中进行表达，可以借此进行蛋白的亚细胞定位、蛋白互作和蛋白纯化等实验操作. 大功率激光器是工业激光设备的核心部件，近几年来我国在这一领域的技术、工艺水平有了长足的进步，但与美、日、欧盟等发达国家相比我国的大功率激光器的制造水平和应用规模还有很大差距，大量高端大功率激光器件与激光加工成套设备依赖进口，其中一个重要原因是我国的大功率激光器仍然属于研制或小规模生产，没有实现产品标准化，难以提高产品的档次和质量，也限制了产品的发展规模。国家标准大功率激光器应用分技术委员会的成立，将改变这一现状。下一步，委员会将在对国内和国际大功率激光器应用加工设备相关标准进行对比、分析的基础上，编制大功率激光器应用分技术委员会标准体系框架，制订本专业激光器应用和安全辐射等基础标准。