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检测新型病毒特异序列的方法常见的是荧光定量PCR(聚合酶链式反应).因PCR反应模板仅为DNA,因此在进行PCR反应前,应将新型病毒核酸(RNA)逆转录为DNA。在PCR反应体系中,包含一对特异性引物以及一个Taqman探针,该探针为一段特异性寡核苷酸序列,两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;如反应体系存在靶序列,PCR反应时探针与模板结合,DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解,报告基团与淬灭基团分离,发出荧光.
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有什么区别?核酸阳性说明标本中存在病毒核酸,意味着感染者可能具有传染性!IgM抗体阳性,说明患者处于感染早期,IgG抗体阳性说明感染过病毒,但不能确定其是否具有传染性。如康复者,一般检测IgG抗体阳性,如果核酸检测阴性,间隔24小时再测核酸仍然是阴性,那提示其不具有传染性!对于新型病毒的核酸检测,首先根据试剂盒说明书”样本要求“部分进行样本采集,常规的样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。
通常“假阴性”产生原因为:病毒入侵人体初期,人体内病毒量尚未达到可检测的程度!在病毒潜伏期、轻度症状、严重症状的不同时期,人体的不同部位(如鼻咽部、口咽部、气管、支气管和肺泡)的病毒载量会存在差异.所以,采样时机和采样部位的不同,可能导致所采集的标本中没有足够量的病毒;任何检测试剂都有其检测下限(即敏感性),如果患者标本内的病毒达不到所使用试剂的检测下限,则会出现假阴性;实验室仪器设备性能和人员检测能力差、质量管理落实不到位等也会产生“假阴性”;采样不规范、采集部位不当、采集标本不典型,导致标本中被病毒感染的细胞太少或没有。
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获得患者样本后,需尽快进行检测,如无法立即检测需要转运的样本,应按照说明书的要求进行低温封装,并送到专门的检测机构进行检测。检测机构收到样本后,对样本进行核酸提取,核酸提取试剂应使用批准产品说明书中指定的核酸提取试剂盒!病毒RNA需要首先逆转录为cDNA,再进行扩增检测!PCR扩增和检测应使用批准产品说明书中指定的荧光定量PCR仪,通过荧光定量PCR所得到的样本Ct值的大小,可以判断患者样本中是否含有新型病毒!
所有生物都含有核酸,核酸包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),新型病毒是一种仅含有RNA的病毒,病毒中特异性RNA序列是区分该病毒与其它病原体的标志物.新型病毒出现后,我国科学家在极短的时间里完成了对新型病毒全基因组序列的解析,并通过与其它物种的基因组序列对比,发现了新型病毒中的特异核酸序列!临床实验室检测过程中,如果能在患者样本中检测到新型病毒的特异核酸序列,应提示该患者可能被新型病毒感染!
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