然而，SPAAC反应的反应速率本身就很低（例如0.1至0。9M–1s–1），限制了它们在相对高浓度应用中的使用（例如蛋白质-小分子偶联、细胞标记）。对于低生物分子浓度（例如5µM）的应用，逆需Diels-Alder连接对反式-环辛烯-四嗪（TCO–Tz）是一对选择.化学选择性TCO–Tz连接对具有任何其他生物正交连接对都无法比拟的超快动力学（800M–1s–1）。超快动力学、选择性和长期水稳定性的结合使TCO–Tz成为低浓度应用（如蛋白质-蛋白质偶联）的理想配对。

　　ClickChemistryTools一直致力于不断开发和扩展连接产品系列!我们的研究部门由多元化的科学家组成，他们致力于利用*新的研究成果来创造新型交联和标记试剂。我们的产品被用于推进国内和世界各地许多*名研究和学术机构的药物发现、治疗方法和诊断技术.我们所有的研发以及产品制造均在我们14,000平方英尺的*先进设施中进行，该设施满足或超过所有生产和安全要求!我们的专业科学家团队可以提供及时的技术支持，以满足客户的任何需求，并为*佳使用我们的产品提供具体建议!

　　超快动力学、选择性和长期水稳定性的结合使TCO–Tz成为低浓度应用（如蛋白质-蛋白质）的理想配对结合.示例应用程序使用20倍摩尔过量的四嗪-PEG5–NHS酯在BupH缓冲液（pH5）中标记五个山羊IgG样品（100µL，5mg/mL、4mg/mL、3mg/mL、2mg/mL和1mg/mL）.类似地，在BupH缓冲液（pH5）中以0mg/mL的浓度标记0！1mLHRP（500µg），使用将20倍摩尔过量的TCO–PEG4–NHS酯持续60分钟!

　　示例应用程序使用20倍摩尔过量的四嗪-PEG5–NHS酯在BupH缓冲液（pH5）中标记五个山羊IgG样品（100µL，5mg/mL、4mg/mL、3mg/mL、2mg/mL和1mg/mL）.类似地，使用20倍摩尔过量的TCO–PEG4–NHS酯标记BupH缓冲液（pH5）中0mg/mL的0。1mLHRP（500µg）60分钟！在去除过量试剂并测定每种蛋白质浓度后，将过量3倍的HRP–TCO以5mg/mL、4mg/mL、3mg/mL、2mg/mL和1mg/mL的浓度添加到IgG–四嗪中.

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　　在低生物分子浓度（例如5µM）下，SPAAC由于适度的动力学（例如0！3至3M–1s–1）而不足，并且铜催化的炔烃-叠氮化物环加成点击反应可能会危及系统的生存能力，反式-环辛烯-四嗪（TCO–Tz）是选择的反应对！这种连接化学是基于反式环辛烯和四嗪反应对之间的逆需求Diels-Alder环加成反应，形成二氢哒嗪键（图4）。化学选择性TCO–Tz连接对具有任何其他生物正交连接对都无法比拟的超快动力学（800M–1s–1）！

　　因此，只有一小部分化学转化适用于在环境温度下在pH中性的水性环境中对高度官能化的生物分子（如蛋白质、核酸和糖）进行生物正交连接，同时仍保持生物功能!适合特定应用的特定连接策略的选择基于不同的因素!铜催化的叠氮化物-炔烃环加成反应（CuAAC）的使用*限于铜毒性不重要的应用（例如肽或寡修饰，或细胞裂解物标记）.在这方面，菌株促进的炔烃-叠氮化物环加成反应（SPAAC）更适合生物偶联，因为不需要催化剂或额外的试剂!

　　在去除过量试剂并测定每种蛋白质浓度后，将过量3倍的HRP–TCO以5mg/mL、4mg/mL、3mg/mL、2mg/mL和1mg/mL.60分钟后，通过SDS–PAGE分析每个偶联反应的等分试样（1µL）。货号名称CAS号A133DBCO–NHSEsterCAS1353016-71-3A102DBCO–C6–NHSEsterCAS1384870-47-6A102PDBCO–PEG5–NHSEsterCAS1378531-80-61400SulfoDBCO–TFPEster1260DBCO–PEG5–TFPEsterA124DBCO–Sulfo–NHSEsterCAS1400191-52-71259DBCO–STPEster1230SulfoDBCO–Maleimide1023MethyltetrazineDBCOA105DBCO–PEG4–BiotinCAS1255942-07-4A116WSDBCO–BiotinCAS1363444-70-5A118DBCO–mPEG5kDaA119DBCO–mPEG10kDaA120DBCO–mPEG20kDaA121DBCO–mPEG30kDa1310AFDye405DBCO1274AFDye430DBCO1278AFDye488DBCO1282AFDye532DBCO1286AFDye546DBCO1290AFDye555DBCO1294AFDye568DBCO1298AFDye594DBCO1302AFDye647DBCOA127DBCOCarboxyrhodamine110A131DBCOTAMRAA140DBCOCy3A130DBCOCy51046DBCOCy51047DBCOCy71190MBTM488DBCO1174MBTM543DBCO1184MBTM594DBCOTA102Alkyne–PEG4–Acid1080PropargylAcidTA103Alkyne–PEG4–NHSEsterTA111Propargyl–NHSEster1162PCAlkyne–NHSEster产品：TCO四嗪配体的试剂DBCO试剂无铜点击化学点击化学叠氮化物/炔烃试剂含氟叠氮化物探针下一代叠氮化物探针代谢标记试剂可切割点击化学生物素探针无生物素/链霉亲和素富集试剂盒和培养基TCO四嗪配体TCO试剂四嗪选择指南四嗪试剂荧光四嗪DBCO试剂标记试剂和构建块生物素化试剂荧光试剂炔烃标记试剂和构建块生物素化试剂荧光试剂叠氮化物标记试剂和构建块生物素化试剂荧光试剂荧光叠氮化物探针34荧光吡啶叠氮化物三功能点击化学生物素探针可切割点击化学生物素探针DADPS生物素探针光可切割生物素探针Dde生物素探针双偶氮生物素探针单击化学辅助试剂代谢标记试剂富集培养基和试剂盒不可裂解的富集试剂盒可裂解的浓缩试剂盒和培养基点击功能化琼脂术语生物正交化学是指在生物系统中发现的其他丰富化学官能团存在的情况下，在不与天然生物化学过程相互作用或干扰的情况下发生的任何化学反应.