温和的用1毫升移液管吸取，直到胶滴完全溶解!将含有细胞球体的溶液吸入5毫升离心管，用1000rpm的转速离心10分钟，移除上清液体并收集细胞球体做分析！D、收集单颗细胞准备程序在分离单细胞前，先按上述溶胶与收集细胞球体准备程序进行操作添加trypsin-EDTA并与收集的细胞球体于37°C混合反应.用1毫升移液管混合，直到细胞体完全分解。待细胞球体完全分解，加入3倍体积的1XPBS，并用1000转的转速进行离心10分钟，并移除上清液体收集沉淀的单细胞做分析.

　　2011年，日本RIKEN发育生物学中心的研究人员，利用类器官培养将胚胎干细胞成功构建成视杯结构(opticcup)。3D类器官培养被杂志选为2013年突破技术，该领域研究人员分别建构出微型大脑、肝芽以及迷你肾.2类器官与肿瘤生物学这些年，类器官培养技术更是广泛运用在肿瘤生物学体外培养，研究癌症的形成；美国纽约冷泉港实验室肿瘤学家Tuveson团队，在2015年和HansClevers④合作共同创建结肠癌肿瘤细胞类器官；其团队更进一步在胰腺癌患者的活体手术取得组织，建构胰腺类器官，作为筛选平台!

　　Biozellen3D类器官培养基质胶套使用步骤A、试剂制备A基质胶：将A基质胶溶于37℃水浴槽回温10分钟，确认完全融解！C缓冲溶液(1X)制备：使用前将10XC缓冲溶液用冰的无细胞培养液(例如：无血清DMEM、opt-MEM)制备成1XC缓冲溶液.(不要用PBS稀释C缓冲液)!D缓冲溶液(1X)制备:使用前用冷的1xPBS稀释10XD缓冲溶液至1XD缓冲溶液!B、Biozellen3D类器官培养基质胶的制备全部步骤需要在无菌环境内操作，操作步骤如下：将24孔培养板放置于冰上预冷。

　　经典二维细胞培养方法，从1885年德国科学家从鸡胚中分离细胞至今，解决了许多生命科学问题，但是和细胞能够以（zuì）佳生长状态的体内环境并不相同！近年来，为尽可能的模仿细胞在生物体内的生长环境，得到更接近类似于体内生长的细胞,越来越多研究人员开始关注三维细胞、类器官培养技术.20世纪80年代左右，美国劳伦斯伯克利国家实验室的MinaBissell和WilliamOlePeterson①在乳腺癌的研究中发明了三维细胞培养技术,他们的研究发现，以三维培养正常的乳腺上皮细胞形成了腺泡状单层管状结构,同时具有原癌基因激活的乳腺上皮细胞形成了碗状腺泡结构，而这是在2D培养时所观察不到的现象！

济南3D类器官培养要求

　　产品说明货号：B-P-00003-B-P-00003-B-P-00003-10规格：2ml-kit、4ml-kit、10ml-kit保存条件：-20℃，1年保存产品描述Biozellen3D类器官培养基质胶套装包含全套胶体试剂与溶解试剂，可进行3D类器官培养与微环境等相关实验应用；本试剂盒操作便利且可调控胶体硬度进行多种类器官培养测试；高分子胶体可快速形成水凝胶，建议操作此培养胶体前详读此使用指南。

　　待胶体成胶后，添加1毫升冰的1XC缓冲溶液，并盖过步骤3的胶溶液，固定15分钟。待15分钟固定后，小心的吸取C缓冲溶液并置换为适合此细胞生长之培养基溶液.将含有细胞的胶于37°C二氧化碳培养箱内进行7~14天的培养，并观察细胞球体的形成，按正常培养基更换频率进行更换操作!C、溶胶与收集细胞球体准备程序小心的将培养基吸取移除，并用1XPBS进行清洗！小心的将1XPBS吸取移除，并添加1毫升冰的D缓冲溶液，盖过胶滴于室温反应5分钟!