）Ⅱ、细胞活性检测在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）.将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5%CO2的条件下）!向每孔加入10μL的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）!将培养板在培养箱内孵育1-4小时。用酶标仪测定在450nm处的吸光度!如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL0！1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下!

　　CCK用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定等.注意事项：①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间.②有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔减的差异。加入CCK试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数！③白细胞可能需要培养较长时间!④当使用标准96孔板时，贴壁细胞的至小接种量至少为1,000个/孔(100μL培养基).

杭州细胞增殖及毒性检测CCK8试剂盒实验结果分析

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　　细胞增殖及毒性检测CCK试剂盒——CCK8包装规格货号：K009-100、K009-500、K009-1000、K009-3000规格：100T、500T、1000T、3000T储存条件:4℃避光保存，有效期一年。产品说明CellCountingKit简称CCK试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯（ben）基)-3-(4-硝苯（ben）基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒!

　　操作说明Ⅰ、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞!按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔.接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线.根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。

　　如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL0！1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下.在24小时内吸光度不会发生变化！注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响！当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

　　活力计算：细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）]×100A（加药）：具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度A（空白）：具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度A（0加药）：具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力保存条件：4℃干燥避光保存，有效期一年！仅供科学研究使用，禁止用于它用。ZETALIFE介绍：美国ZETALIFE公司成立于1989年，是国际无血清细胞培养基DMEM/F12主要完成人，有三十几年的胎牛血清、无血清细胞培养基、以及干细胞、免疫细胞及肿瘤细胞等多种不同类型哺乳动物细胞的无血清培养液生产经验；也是目前世界胎牛血清、无血清培养基至大的OEM供应商之一；每批血清均有完整的血源证明文件、兽医师检验证明及品质测试报告；ZETALIFE血清在100级的无菌间采用全自动方式制造生产，具有良好的可再现性及可追溯性。　　目前，常规的测量方法是通过取样后于平板培养基培养计数的方法（图1），该测量方法能够检测可生长的微生物数量。传统的实验室平板计数方法需要取样、培养皿培养并等待数天，整个过程存在很多变数，包括样品制备、培养基种类、培养时间和温度，对于特殊样品，可以调节至最佳状态以加快检测速度。通过人工计数方法并换算成单位体积菌落总数。这种检测方法需要占用大量的人工，样品制备过程中容易受到污染，并且需要等待非常长的培养生长时间。部分仪器或设备具有自动取样和计数的功能，但还是需要漫长的培养时间。