生化试剂
公司地址:深圳市宝安区新安街道宝民社区创业二路5号建设银行楼创业二路5-1
企业信息
注册资本:50---100万
注册时间: 2018-04-25
1MNaCl中,制成3×染色液!(例如将15μLMxSafe/MxSafePlus10,000×储液和5mL1MNaCl加到45mLH2O中)!将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3×染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右,合适染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同!对于含5~10%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min到1h,并随丙烯酰胺含量增加而延长!注意事项:●用泡染法染色时,染料用量较多!
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●如果总是看到条带弥散或分离不理想,建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在,则说明问题与染料无关,请尝试:降低琼脂糖浓度;选用更长的凝胶;延长凝胶时间以保证边缘清晰;改进上样技巧或选择泡染法染色!●此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。2.泡染法按照常规方法进行电泳!用H2O将MxSafe/MxSafePlus10,000×储液稀释约3,300倍到0!
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EB核酸染料:灵敏度低;稳定性高;条带不弯曲,DNA片段不迁移;安全性方面,①分子量小,易挥发升华,易吸入人体,不易生物降解,在体内长期残留。②艾姆斯氏测试结果表明,EB容易引起有机体突变,是一种强诱变剂,具有高致癌性!适用性方面,100bp以上电泳染色,背景荧光信号高;使用普通紫外凝胶透射仪观察。Goldview核酸染料:灵敏度低;稳定性高;条带不弯曲,DNA片段不迁移;安全性方面,①主要成分为吖啶橙,是一种煤焦油提取物,具有高毒,致癌,高诱变性。
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②艾姆斯氏测试结果表明,MxSafePlus在凝胶染色浓度下完全没有诱变性,因此完全没有致癌毒性.适用性方面,通用大小片段电泳染色,适用于使用254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察!SYBRGreenI核酸染料:灵敏度高;稳定性低;染料浓度较高时,条带容易弯曲,DNA片段迁移的现象明显;安全性方面,属花箐染料,能透过细胞膜进入活体细胞内,但容易生物降解,不会在体内残留,安全无毒!适用性方面,100bp以上电泳染色,适用于使用254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察.
●在极少数情况下,质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低,此时建议同时尝试两种染色方法以决定哪种方法更加合适!使用方法1.胶染法(用法同EB)制胶时加入MxSafe/MxSafePlus核酸染料(例如:每50mL琼脂糖溶液中加入5μLMxSafe/MxSafePlus10,000×储液(以此比例类推)!按照常规方法进行电泳.鉴于MxSafe/MxSafePlus的高灵敏性,建议减少DNA的上样量,推荐每条泳道DNA上样量是传统上样量的1/2,例如:传统上样量是5ul/泳道,使用本成品用量就是5ul/泳道,但是不能减少核酸染料的用量(例如:每50mL琼脂糖溶液中继续加入5μLMxSafe/MxSafePlus)!
●与EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置:标准的EB滤光片或SYBR滤光片都适用,使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可,在300nm紫外光附近可得到很好激发!但是MxSafe不能被488nm氩离子激光器或相似波长的可见光完全激发,因此不推荐使用此类激发装置的成像系统。对于此类装置,我们推荐您使用MxSafePlus,它和SYBRGreenI的光谱相似,灵敏度相当,但更加稳定!各核酸染料的比较MxSafe核酸染料:灵敏度高;稳定性高;条带不弯曲,DNA片段不迁移;安全性方面,它是一种油性大分子,不易挥发升华,不易吸入人体,不能穿透细胞膜进入活体细胞内,安全无毒!
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