操作说明Ⅰ、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞！按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔！接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线！根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间！

　　细胞增殖及毒性检测CCK试剂盒——CCK8包装规格货号：K009-100、K009-500、K009-1000、K009-3000规格：100T、500T、1000T、3000T储存条件:4℃避光保存，有效期一年。产品说明CellCountingKit简称CCK试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯（ben）基)-3-(4-硝苯（ben）基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒!

深圳常用的CCK8试剂盒使用方法

　　CCK法与其它检测方法之间的比较：MTT法：形成的formazan的水溶性差，产品性状为粉末，使用方法为配成溶液后使用，检测灵敏度高，检测时间较长，检测波长为560-600nm，细胞毒性高,细胞形态完全消失，试剂稳定性一般，可以大批量样品检测，便捷程度一般。XTT法：形成的formazan的水溶性好，产品性状为2瓶溶液，使用方法为现配现用，检测灵敏度很高，检测时间较短，检测波长为420-480nm，细胞毒性很低,细胞形态不变，试剂稳定性较差，非常合适大批量样品检测，便捷程度便捷。

　　）Ⅱ、细胞活性检测在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）.将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5%CO2的条件下）！向每孔加入10μL的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。将培养板在培养箱内孵育1-4小时!用酶标仪测定在450nm处的吸光度!如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL0!1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。

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　　检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100μL培养基)!如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液！⑤如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度至高。⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响.