操作说明Ⅰ、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞!按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔.接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间.

　　CCK用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定等.注意事项：①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间.②有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔减的差异.加入CCK试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数!③白细胞可能需要培养较长时间！④当使用标准96孔板时，贴壁细胞的至小接种量至少为1,000个/孔(100μL培养基)。

　　）Ⅱ、细胞活性检测在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）!将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5%CO2的条件下）!向每孔加入10μL的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）.将培养板在培养箱内孵育1-4小时.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL0！1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下！

　　CCK法与其它检测方法之间的比较：MTT法：形成的formazan的水溶性差，产品性状为粉末，使用方法为配成溶液后使用，检测灵敏度高，检测时间较长，检测波长为560-600nm，细胞毒性高,细胞形态完全消失，试剂稳定性一般，可以大批量样品检测，便捷程度一般.XTT法：形成的formazan的水溶性好，产品性状为2瓶溶液，使用方法为现配现用，检测灵敏度很高，检测时间较短，检测波长为420-480nm，细胞毒性很低,细胞形态不变，试剂稳定性较差，非常合适大批量样品检测，便捷程度便捷！

浙江细胞毒性检测CCK8试剂盒原理

　　2018年ZetaLife公司与美国加利福尼亚大学旧金山校区联合开发用于哺乳动物细胞、活体动物转染的AdvancedDNARNA第三代多肽小分子转染试剂，此技术成为新的全球蛋白功能、免疫细胞及干细胞治疗、研发及生产的主要关键技术之深圳市安培生物科技有限公司是美国ZETALIFE公司的中国区总代理!精心经营细胞培养品试剂，均经过反复充分验证，产品效果好且重复性佳！尊敬的客户您如在订购过程中遇到任何问题都可以与我司在线客服联系寻求帮助。

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　　检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100μL培养基).如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。⑤如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度至高！⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响！

　　细胞增殖及毒性检测CCK试剂盒——CCK8包装规格货号：K009-100、K009-500、K009-1000、K009-3000规格：100T、500T、1000T、3000T储存条件:4℃避光保存，有效期一年。产品说明CellCountingKit简称CCK试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯（ben）基)-3-(4-硝苯（ben）基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒！