产品说明：产品名称AdvancedDNARNATransfectionReagent储存条件常温运输，4℃保存，可保存两年，拒绝反复冻融!包装规格货号：AD60002AD600050、AD60007AD600150、AD600500、AD601000规格：0！25ml、0!5ml、0.75ml、5ml、5ml、10ml使用说明：材料准备RNA浓度20uM/L质粒DNA浓度300ng-2ug/ul（注意：①溶解于无菌双蒸水或超纯水；②无内毒素）操作步骤提前1天接种细胞：细胞汇合度在60-80%左右，再进行转染!

　　在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛！转染，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术.随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径!电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术！

　　转染试剂与核酸混匀后用移液器吹打10-15次，室温孵育10-15分钟后即可加入细胞培养板。转染24小时后进行正常换液，不能像Lipo2000一样转染4-6小时后换液.原代细胞、免疫细胞转染时，细胞基础培养基里面不能含有双抗培养基。难转染细胞高效率转染案例图赏：高效率转染N2a/Neuro-2a小鼠神经瘤母细胞高效率转染NK细胞高效率转染THP-1悬浮细胞高效率转染人淋巴悬浮细胞ZetaLifeAdvancedDNARNA转染试剂系列价格：品牌：美国ZetaLife货号：AD6000250！

　　核酸复合物制备：将核酸与转染试剂按照1:1关系直接混合，用移液器吹吸10-15次混匀，室温静止10-15分钟。在细胞培养基中加入核酸复合物：根据参考用量在细胞中加入核酸复合物，并轻轻混匀；细胞培养基里面可以含有血清。细胞换液：转染24小时后对细胞进行正常换液，悬浮细胞转染过程中不用换液.分析结果：质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率，48-96小时检测mRNA或蛋白表达！若进行稳定表达细胞株的筛选，则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选.

　　siRNA转染后9小时荧光检测转染效率，48-72小时检测mRNA或蛋白表达.转染操作示意图不同转染实验各成分推荐用量各品牌转染试剂类型与ZetaLife转染试剂的差异比较：Thermo品牌Lipo2000采用阳离子脂质体，需要更换培养基；特点是毒性大；转染前后需要更换培养基；可以转染质粒DNA、siRNA（效果差）！Thermo品牌Lipo3000采用阳离子脂质体，需要更换培养基；特点是相比Lip2000毒性略小；转染前后需要更换培养基；可以转染质粒DNA、siRNA（效果较差）。

杭州原代神经元细胞转染试剂的作用

　　注意事项：质粒DNA必须溶解于无菌双蒸水或超纯水，但不能溶解于提取试剂盒提供的Buffer.溶解于Buffer的质粒转染效率会下降80%左右，甚至会转染失败。质粒必须去除内毒素，内毒素对细胞将产生很大的细胞毒性，会导致转染效率下降70%-80%左右，甚至导致转染失败（推荐使用Qiagen、TIANGEN、Omega去内毒素质粒提取试剂盒）！复合物的制备过程中是绝不能用其他任何试剂对核酸或转染试剂进行稀释，只需将核酸和转染试剂两者按1:1比例直接混合，如果进行了稀释会导致转染失。

　　Thermo品牌RNAiMAX采用阳离子脂质体，需要更换培养基；特点是专门用来转RNA，对于细胞系的转染效率一般，对干细胞和神经原代细胞转染效果差.Promega品牌FuGENE6采用脂质混合体、特定缓冲液，需要更换培养基；特点是本质还是脂质体；只能转DNA；含有微量动物源成分，适用细胞种类因此受限；转染前后需要更换培养基；亲塑性，转染效率会因使用PE管（塑料管）而大打折扣.Roche品牌FuGENEHD采用脂质混合体、特定缓冲液，需要更换培养基；特点是本质还是脂质体；只能转DNA；亲塑性，转染效率会因使用PE管（塑料管）而大打折扣！