细胞转染简介：随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具！在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。转染，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术!随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。

　　溶解于Buffer的质粒转染效率会下降80%左右，甚至会转染失败.质粒必须去除内毒素，内毒素对细胞将产生很大的细胞毒性，会导致转染效率下降70%-80%左右，甚至导致转染失败（推荐使用Qiagen、TIANGEN、Omega去内毒素质粒提取试剂盒）！复合物的制备过程中是绝不能用其他任何试剂对核酸或转染试剂进行稀释，只需将核酸和转染试剂两者按1:1比例直接混合，如果进行了稀释会导致转染失!转染试剂与核酸混匀后用移液器吹打10-15次，室温孵育10-15分钟后即可加入细胞培养板.

　　转染24小时后进行正常换液，不能像Lipo2000一样转染4-6小时后换液。原代细胞、免疫细胞转染时，细胞基础培养基里面不能含有双抗培养基。转染操作示意图不同转染实验各成分推荐用量ZetaLifeAdvancedDNARNA转染试剂系列价格：品牌：美国ZetaLife货号：AD6000250。25ml/1590元品牌：美国ZetaLife货号：AD6000500!5ml/2390元品牌：美国ZetaLife货号：AD6000750!

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　　转染效率高，适用细胞种类多，可转染质粒DNA、siRNA和小动物活体转染.ZetaLifeAdvancedDNARNA转染试剂系列价格：品牌：美国ZetaLife货号：AD6000250.25ml/1590元品牌：美国ZetaLife货号：AD6000500.5ml/2390元品牌：美国ZetaLife货号：AD6000750！75ml/2890元品牌：美国ZetaLife货号：AD6001505ml/4490元品牌：美国ZetaLife货号：AD6005005ml/14580元品牌：美国ZetaLife货号：AD60100010ml/27480元产品说明：产品名称AdvancedDNARNATransfectionReagent包装规格货号：AD60002AD600050、AD60007AD600150、AD600500、AD601000规格：5ml储存条件常温运输，4℃保存，可保存两年，拒绝反复冻融!

　　细胞换液：转染24小时后对细胞进行正常换液，悬浮细胞转染过程中不用换液。分析结果：质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率，48-96小时检测mRNA或蛋白表达！若进行稳定表达细胞株的筛选，则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选!siRNA转染后9小时荧光检测转染效率，48-72小时检测mRNA或蛋白表达。注意事项：质粒DNA必须溶解于无菌双蒸水或超纯水，但不能溶解于提取试剂盒提供的Buffer!

　　使用说明：材料准备RNA浓度20uM/L质粒DNA浓度300ng-2ug/ul（注意：①溶解于无菌双蒸水或超纯水；②无内毒素）操作步骤提前1天接种细胞：细胞汇合度在60-80%左右，再进行转染!核酸复合物制备：将核酸与转染试剂按照1:1关系直接混合，用移液器吹吸10-15次混匀，室温静止10-15分钟!在细胞培养基中加入核酸复合物：根据参考用量在细胞中加入核酸复合物，并轻轻混匀；细胞培养基里面可以含有血清!

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