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公司地址:上海松江区明中路1588弄1072号
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注册资本:50---100万
注册时间: 2015-08-20
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虽然利用这种方法不一定能实现组分的纯化分离,但可以通过监测界面的移动来测定各组分的沉降速度.要想实现组分间的分离,必须在所需样品沉降之后停止离心过程!沉积的样品再悬浮到新的溶剂中,并以较低的速度离心使大颗粒的污染物沉降,而被纯化的样品留在溶液中,经过反复多次地离心才能得到纯的样品,这种方法就叫差示沉降离心法,它对细胞组分间的分离非常有用!也可以通过逐渐增大转速的方法实现不同组分间的分离!移动区带超速离心法差示离心法离心前各组分均匀分布在整个溶液中,所以分离一般不理想,而移动区带超速离心法是一种密度梯度(Dens心Gradient)离心技术,在离心之前离心管中溶液的密度不同(从上到下密度增大),梯度介质中zui大密度应小于样品物质的zui小密度,其特点是物质的分离取决于样品物质颗粒的质量.即样品物质的沉降系数,而不是取决于样品物质的密度,因而适合于分离密度相近而大小和形状不同的物质,这属于一种非平衡态分离法!
储备液一般使用两种密度的蔗糖溶液或两种密度的氯化铯溶液来制备!样品一般铺在溶液的表面,然后开始离心.在实验方法上也可以采用平衡密度梯度法,在这种离心法中,介质的梯度不是预先配制,而是在离心过程中,由于离心力的作用而逐渐形成.样品物质和氯化铯的浓盐溶液充分混合均匀,离心开始之后,铯盐由于离心力的作用,自离心管口至离心管底形成连续递增的密度梯度!生物样品中不同组分物质在离心过程中沉降或上浮以寻找与自身密度相同的溶液密度梯度区带,不同的物质最终到达相应的区带,从而实现分离。
在离心实验的报告中,Fcf、r平均、离心时间t和液相介质等条件都应表示出来,因为它们都与样品的沉降速度有直接的联系!显然Fcf是一个只与离心机相关的参数,而与样品并无直接的关系!速度与系数一个颗粒要沉降,它必须置换出位于它下方等体积的溶液,这只有当颗粒的质量大于被置换出的液体的质量时才能通过离心的手段达到,否则,在离心过程中颗粒将发生向上漂浮,而不是下沉。当颗粒在运动时,不论方向如何,它都要穿过溶剂分子,所产生的摩擦力总是与颗粒运动的方向相反。
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沉降系数定义为沉降速度与离心力的比率或单位离心场中颗粒的沉降速度,它以svedberg单位计算,1S=1×10-13s。例如,核糖核酸酶A的沉降系数为1.85×10-13s,即可记作1.85S.近年来,在生物化学、分子生物学及生物工程等书刊文献中,对于某些大分子化合物,当它们的详细结构和分子量不很清楚时,常常用沉降系数这个概念去描述它们的大小.如核糖体RNA(rRNA)有30s亚基和50s亚基,这里的s就是沉降系数,现在多地用于生物大分子的分类,特别是核酸!
这种方法依赖于在离心场的作用下低分子量的铯盐密度梯度的形成,一般需要长时间的离心(2~3天)!显然,样品物质的密度应介于介质梯度中zui大和zui小密度之间,否则,样品将沉到离心管的底部或漂浮到溶液的顶层!离心zui大速度方法移动界面超速离心法含几个组分的样品在足够高的离心场中离心时,每种颗粒都达到其zui大沉降速度,这时样品开始分离!离心管的上层逐渐形成透明的上清液,并形成对应于样品各组分的一系列浓度界面,界面的移动相对于每种组分来说是特征的.
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