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公司地址:上海松江区明中路1588弄1072号
企业信息
注册资本:50---100万
注册时间: 2015-08-20
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离心技术,是蛋白质、酶、核酸及细胞亚组分分离的zui常用的方法之一,也是生化实验室中常用的分离、纯化或澄清的方法。尤其是超速冷冻离心已经成为研究生物大分子实验室中的常用技术方法!离心机(centrifuge)是实施离心技术的装置.离心机的种类很多,按照使用目的,可两类,即制备型离心机和分析型离心机!前者主要用于分离生物材料,每次分离样品的容量比较大,后者则主要用于研究纯品大分子物质,包括某些颗粒体如核蛋白体等物质的性质,每次分析的样品容量很小,根据待测物质在离心场中的行为(可用离心机中的光学系统连续地监测),能推断其纯度、形状和相对分子质量等性质。
氯化铯梯度是常用于平衡离心的介质,分辨率很高,可区别密度相差0!05的组分,但离心时间需十几到几十小时,且价格很贵。已有一种商品名叫"Percoll"的聚蔗糖溶液可以代替氯化铯梯度!该介质能迅速形成梯度,使离心时间大大缩短到1-2h而仍有很好的分离效果.并且有配套的标记珠(Densitymarkerbeads)可以测定样品的密度!超速离心机离心机是借离心力分离液相非均一体系的设备。根据物质的沉降系数、质量、密度等的不同,应用强大的离心力使物质分离、浓缩和提纯的方法称为离心。
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一般说,离心机转速在30000r/min以上的称为超速离心.离心技术,特别是超速离心技术是分子生物学、生物化学研究和工业生产中不可缺少的手段.1924年T.Svedberg和Rinde研制出世界上第yi台涡轮超速离心机以来,发展非常迅速,已广泛地应用到科学研究和生产的各个领域!离心机转头zui高转速已达150000r/min(贝克曼OptimaMAX-XP,2010年数据),zui大离心力达1019000Xg(贝克曼OptimaMAX-XP,2010年数据).
两类离心机由于用途不同,故其主要结构也有差异.通常所使用的离心机根据转子转速大小的不同可分为普通离心机、高速离心机和超速离心机三类!离心方法差速离心这种方法是选择不同转速的离心,分别分离各个不同组分!例如先用低速沉降大颗粒和上清液,在高速离心上清沉降中等颗粒,最后超速离心上清沉降小颗粒!采用逐级提高离心力分离上情液的方法,把不同大小的颗粒分开。这种方法比较简单,方便。分离的组份沉到管底,因此可以迅速浓缩所要的组份,减少体积.
但对密度不同、大小类似的物质则不易分离!蔗糖梯度是一种常用的介质。用不同浓度的蔗糖溶液(5%-60%)配成梯度,用于梯度离心!再分别进行收集处于不同区带里的各个组份。沉降平衡离心这是静力学的方法。在离心管中形成一个液体梯度,在离心时各组份以不同的速度下沉,但最终停留在与自己相同的密度中,形成一条狭窄的平衡带,并保持相对的稳定!为了使样品所有组份都能达到它们的平衡位置,需要长时间离心.这种方法适用于分离大小相似但密度不同的物质,如核酸的分离.
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但回收率和纯度是有矛盾的,要提高回收率,势必提高转速或延长离心时间,这样大小相近的颗粒也会沉到管底.因此该法多用于粗提纯或初步浓缩样品。速度区带(或速度梯度)离心本法是将样品放在一个连续的密度梯度液体上,通过离心,大颗粒沉降快,小颗粒沉降慢!经过一段时间,相同的颗粒就在同一深度形成一条带子,因此把各种组份分开来!它适用于分离密度相同、而大小不同的物质,如不同的蛋白质组份密度都差不多,但分子量不一样,用本法很容易将其分开!
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